常用特殊染色

1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。

2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。

3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。

4．注葸事项

(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。

(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。

二、黏液卡红染色

1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入50％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后 将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。

2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。

3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．

4．注意事项

(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。

(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。

(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。

三、石碳酸品红染色

1．第一步准备工作

(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。

(2)配制石碳酸水溶液：将石碳酸结晶放入热水浴溶解后取5 ml与事先预热的蒸馏水95ml匀备用．(以上二种液体可单独保存)。

(3)石碳酸品红染液：取盐基性品红溶液10 ml与5％石碳酸水溶液90 ml混合，使用前过滤。

2．第二步染色方法

切片厚度为6 um，脱蜡至水，石碳酸品红染色30 min至1 h，(或用微波炉高档加热10~20 s)，水洗，用1％盐酸乙醇分化洗掉切片上多余染液，水洗，0.1％美蓝浅染，背景为淡蓝色、冲水、晾干、封固。

3．图示结果：抗酸杆菌呈亮红色，背景呈淡蓝色。

4．注意事项

(1)用微波染色时切片容易脱落．

(2)美蓝染色宜浅。

四、奥辛蓝一PAS染色

1．第一步准备工作

(1)配制奥辛蓝染液；将奥辛蓝1 g溶解于3％的醋酸溶液，调整液体PH值为2.5。

(2)配制PAS染液：将碱性品红1 g加人煮沸的蒸馏水内溶解，温度降至50℃时加入亚硫酰氯1 ml(加亚硫酰氯时要在通风厨内进行)放入冰箱过夜。加入活性碳2 g，摇动混合液1 min，静止10 min后，过滤于棕色瓶内，放置冰箱保存。

2．第二步染色方法

(1)奥辛蓝染色：切片脱蜡至水经3％醋酸溶液l10min，切片直接进入1％的奥辛蓝染色10 min，水洗，必要时用1％的中性红对比染色，水洗。

(2)PAS染色切片厚5um，脱蜡至水，用0.5％过碘酸氧化10min后流水冲洗1 min，用纸吸干切片周围水分，用干燥的吸管吸取PAS染液，滴染10~20 min，流水冲洗1 min，用苏木精浅染1 min，水洗、分化、返蓝、然后进行脱水、透明、封固。

3．图示结果：PAS阳性物质呈玫瑰红色，胞核呈蓝色。

4．注意事项
(1)加亚硫酰氯时要在通风厨内进行。
(2)过碘酸恢复室温才能使用(20℃以内)。
(3)染色时要加对照片。
(4)氧化时间要限制在10 min内。
(5)PAS染液易挥发使染色反应迟缓或红色太浅，加入数滴亚硫酰氯即可。
(6)如果染奥辛蓝-PAS时，省略染苏木精步骤。