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石蜡切片问题处理

石蜡切片基本步骤之一 器材和试剂

一、准备工作

(一)洗涤实验所需器皿:(玻璃器皿的清洗)      

1、 用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷

2、 将器皿在自来水下冲洗干净

3、 将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干

注:一般情况下,经以上步骤后,用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用,如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时,再经自来水彻底冲洗,再用蒸馏水过洗1~3次 烘干备用。

(二)配制: 硫酸洗液的配制

(三)载玻片与盖玻片的处理

1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后,放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时

2. 流水冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍

3. 95%~100%酒精浸泡24小时,用绸布擦干备用

注:在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时,要一片片地投入,使其不致重叠。

二、常用液体的配制

(一)缓冲溶液:

1.磷酸盐缓冲液

A液:0.1mol/L磷酸二氢钠

B液:0.1mol/L磷酸氢二钠

A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(3:7≈PH7.0)

2.枸椽酸缓冲溶液

A液:0.1mol/L枸椽酸

B液:0.1mol/L枸椽酸钠

A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(6.2:42.8≈PH6.2)

(二)固定剂:

1.甲醛:10%甲醛

福尔马林 100ml

蒸馏水 900ml

注:实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2.10%中性福尔马林钙固定液

甲醛液 10ml

蒸馏水 90ml

加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后,放置24小时取上清液使用。 

3.4%多聚甲醛:

8%多聚甲醛

多聚甲醛 8g

蒸馏水 100ml

加温至60℃左右,不时搅拌,成为乳白色溶液。滴加1N NaOH,并不停搅动至液体清明。

1N NaOH

lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量

氧化钠(NaOH );分子量=40.005,当量价=1

1N Na0H的配制方法为:m=40.005/1=40.005g。取40.005gNaOH溶解于1L蒸馏水中

4%多聚甲醛

8%多聚甲醛 50ml

0.1M磷酸盐缓冲液 50ml

PH7.2

先取50 ml 8%多聚甲醛,用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2

4.Bouin液:

苦味酸饱和水溶液 75ml

36%~40%福尔马林液 25ml

冰醋酸 5m1

5.改良Bouin氏固定液

苦味酸饱和水溶液 45ml

95%酒精 45ml

36%~40%福尔马林液 5ml

冰醋酸 5m1

6.Carnoy液:

冰醋酸 10 m1

氯仿 30 m1

无水乙醇 60 m1

以上三者临用前混合,预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。

(三)染色液

1.Harris苏木精液

A液:

苏木精 1g

无水酒精 10ml

B液:

铵矾或钾矾 20g

蒸馏水 200ml

氧化汞 0.5ml

冰醋酸 8ml

将矾溶于水,加热溶解(B液),稍冷后将苏木精酒精液(A液)混入B液,加热,稍冷却,加氧化汞,再继续加热1分钟,染液变为紫色,注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入,防止染液溅出。全冷后呈深紫色,将烧杯口用纱布盖好,隔夜过滤,在过滤液内每96 ml中加4 ml冰醋酸,放置1周后成熟,即可用于染色,保存期1~2个月。此染液在加醋酸后,对核染色特具选择性,故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂,故不能长期储存,但利于配后即用。

2.Mayer苏木精掖

苏木精 1g

钾矾或铵矾 50g

碘酸钠 0.2g

蒸馏水 1000ml

水合氯醛 50g

枸橼酸 1g

将苏木精,钾矾及碘酸钠依次加入水内,略加热并搅拌,此时液体呈蓝色,待全溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟,冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟,染液可较长期贮存使用。核染色鲜明,染色时间5—10分钟。用该染液染色后,不需分化,充分水洗蓝化后即可,伊红复染细胞质,使用一段时间后就要换新溶液。

3.Hasnsen甲矾苏木精的配制

A液:苏木精 1g

无水乙醇 10ml

B液:钾矾 20g

蒸馏水 200ml

C液:高锰酸钾 1g

蒸馏水 16ml

三液分别溶化后,将A液倒入B液,再加入C液3ml,充分搅拌均匀后加热至沸腾,1分钟左右,将容器置于冷水中使其迅速冷却,此液配后即可使用,染后无需碱化,细胞核即为蓝色,效果较好,高锰酸钾可以迅速化苏木精(每1g苏木精需0.177g高锰酸钾氧化)。

4.伊红

0.5~1%水溶液或酒精溶液。

1.水溶性伊红

伊红 5~10g

蒸馏水 1000ml

冰醋酸 10滴

先将水溶性伊红加入蒸馏水中,用玻璃棒搅起泡沫后过滤,再加冰醋酸。

2.醇溶性伊红

伊红 5~10g

70%~90%酒精 1000ml

冰醋酸 10滴

(四)其它

1.麻醉剂:

2~4%戊巴比妥钠,1ml/kg体重(45mg/kg)。

2.各级浓度酒精的配制

75%;85%;95%;100%酒精。75%和85%酒精用95%酒精配制;(取75ml95%酒精,加水至95ml,即为75%酒精)

3.盐酸洒精

多用于多种染色过程中的分色,如苏木精染色后分色。配法是在100ml的70%酒精内加0.5~1ml的浓盐酸(Hcl)。用盐酸酒精分色后要经自来水充分冲洗组织切片,去除所含的酸再作其他处理。

4.碘酒

取碘5g,溶于95%酒精80ml,再加入20ml蒸溜水即成

5.生理盐水

以氯化纳0.85~0.90g溶于100m1蒸馏水配成的生理盐水适用哺乳动物

 

泰维科技 www.taiva.com.cn

 

时  间:2013-6-28 17:34:11

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